菜心中SDS-PAGE向负极泳动的富含苯丙氨酸的蛋白的发现

在提取乙醇酸氧化酶同工酶的过程中, 发现了一种在SDS变性下向负极泳动的富含苯丙氨酸的碱性蛋白.在3次重复实验中, 均可以从SDS-PAGE后的负极缓冲液中获得这种蛋白, 其碱性与酸性氨基酸残基的比例分别高达1.46、1.28和0.89,而苯丙氨酸含量分别高达为60.00%、65.62%和62.30%.其余氨基酸残基的含量则和普通蛋白的相近似.由于该富含苯丙氨酸的碱性蛋白是水溶性的, 碱性氨基酸残基应主要分布在蛋白的表面,而苯丙氨酸则组成一个强疏水内核.     

过表达PKCε和PKCη在HCC1806细胞中的抗凋亡作用

为探讨PKCε、PKCη对乳腺癌细胞中TNFα诱导凋亡的影响,采用PCR技术,从人肌肉cDNA文库中克隆了全长PKCε和PKCη序列,亚克隆至pcDNA3,转化HCC1806细胞,并选择出稳定的转化细胞株.然后用流式细胞仪检测了PKCε、PKCη过表达对DNA断裂的影响,用Western印迹方法检测了PKCε、PKCη过表达对PARP、caspase 3和caspase 8水解的影响,以及对Bcl-2,Bax表达的影响,和对MAPK磷酸化的影响.流式细胞仪分析DNA含量的结果表明：TNFα处理后,HCC1806/PC、HCC1806/ε、HCC1806/η的sub_G1状态的DNA含量分别为：57.7%、23.3%、14.6%.Western印迹结果表明,当用0.01nmol/L TNFα处理,HCC1806/η中PARP、caspase3、caspase8的水解程度最低,HCC1806/ε中次之,HCC1806/PC最严重;与HCC1806/PC比较,无论用不用TNFα处理,HCC1806/ε都表达更高的Bcl_2,而HCC1806/η不影响Bcl_2的表达.过表达PKCη而不是PKCε抑制了由TNFα引起的p38和JNK的磷酸化,并且是JNK的抑制剂SP600125而不是p38的抑制剂SB220025抑制了PARP的裂解.以上结果显示,过表达PKCε、PKCη可能通过不同的信号途径在HCC1806中起抗凋亡作用,PKCε上调了bcl_2的表达,而PKCη抑制了JNK的磷酸化.     

百里酚对刺足根螨的毒力实验

根据植物精油在抗菌、杀虫和杀螨等方面的研究,考虑其无污染、无残留、用量少、价格低以及可阻止或延缓螨类的抗药性的特点,我们采用药膜法,进行了百里酚对刺足根螨[Rhizoglyphus echinopus(Fumouze&Rob in)]的毒力实验。结果表明,24 h的LC50=2.2222 g.L-1;48 h的LC50=0.6086 g.L-1。该实验为植物油应用于害螨防治提供了参考。     

单眼睑缝合1周建立形觉剥夺性弱视猫模型

目的比较正常组、模型组及对照组的图形视觉诱发电位(PVEP)和扫描视觉诱发电位(SVEP)视力,研究各组的视觉电生理表现,探讨单眼睑缝合1周是否可以建立形觉剥夺性弱视模型。方法分析三组PVEP的波形变化、潜时及完成一次诱发反应的时间;比较各组由SVEP得出的客观视力。结果①正常组PVEP由2个波峰组成“M型”(正向波向上),模型组及对照组出现波的分离—波形由多个波组成,而且完成一次反应的时间延长。②缝合侧的N75延迟,SVEP视力较正常组差且差别有统计学意义。③对照组未缝合侧视力恢复到正常水平而缝合侧视力仍差且与正常组有统计学差异。结论短期形觉剥夺的视觉电生理变化是弱视猫的一种表现,单眼睑缝合1周即可建立形觉剥夺性弱视猫的模型。     

产碱性纤维素酶嗜碱芽孢杆菌AH-8的研究

从贵州、云南、海南、安徽、四川、辽宁等地采集碱性土样,分离筛选到1株能稳定的产生碱性纤维素酶的嗜碱性芽孢杆菌AH-8。研究表明,该菌株最适产酶温度为37℃,最适发酵时间为36 h;采用均匀设计法对其发酵培养基进行优化,优化培养基配方(%):淀粉3.0,胰蛋白胨1.5,牛肉膏1.5,葡萄糖0.3,KH2PO40.1,初始pH 10.0。在优化培养基条件下,其产酶量提高了120%。碱性纤维素酶最适反应温度为60℃;最适反应pH 10.0;0.01%Co2 对酶活力有一定激活作用。     

蓝光对真菌的调控作用及研究进展

蓝光是环境中的重要信号因子,可影响微生物特别是真菌的生理周期、形态变化、基因表达,进而影响微生物的代谢活动。在国外,蓝光对微生物的影响研究是一个热点问题,并进行了较深入的研究,已在真菌中发现了一些蓝光受体因子。主要综述了蓝光对真菌影响的一些研究进展。     

啤酒废酵母制备碱不溶性葡聚糖

以啤酒废酵母为原料,采用碱提法确定了碱不溶性葡聚糖的制备条件,使用1.0 mol.L-1的NaOH溶液,以固液比为1:5进行提取,45℃处理6 h。此条件下碱不溶性葡聚糖得率可达10.94%,其多糖质量分数可达91.57%。红外光谱分析显示产品为β-(1-3)键的葡聚糖,其中不含甘露聚糖。     

Annexin Ⅱ基因克隆及真核表达载体的构建

目的克隆人AnnexinⅡ全长cDNA序列,并构建其真核表达载体。方法根据Genbank中AnnexinⅡ基因的碱基序列,利用RT-PCR的方法从人肾脏组织中扩增编码AnnexinⅡ基因,将目的片段与pBS-T载体连接,利用亚克隆的方法将AnnexinⅡ的cDNA片段克隆到pcDNA3.1载体中,并进行序列测定。结果DNA测序证实该片段序列与Genbank完全一致。结论成功克隆人Annexin II全长cDNA序列,并构建出pcDNA3.1—Annexin II真核表达载体,为进一步研究其在肾脏疾病中的作用和机制奠定基础。     

锅柄式PCR及其在混合谱系白血病基因断裂区中的应用

染色体11q23的混合谱系白血病(MLL)基因的断裂点簇集群区(BCR)的转位,可引起婴儿急性白血病及与DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的生化治疗法相关的白血病。由于MLL基因包括大约30个不同的转位伴侣基因,几个断裂点所在的伴侣基因的序列还不清楚,因而对MLL基因断裂点的PCR克隆是很困难的。锅柄式PCR,即用已知5'端序列和未知的3'端伴侣基因序列以形似一个锅和一个柄的模板扩增断裂点基因DNA,是一种克隆MLL基因断裂区的新方法,可以扩增未知3'端序列的断裂点簇集群区。     

Tissue-engineered mesh for pelvic floor reconstruction fabricated from silk fibroin scaffold with adipose-derived mesenchymal stem cells

A tissue-engineered mesh fabricated with adipose-derived mesenchymal stem cells (AD-MSCs) cultured on a silk fibroin scaffold is evaluated for use in female pelvic reconstruction. Thirty-five female Sprague Dawley rats were divided into four groups. Group A (n?=?10) were implanted with polypropylene meshes, Group B (n?=?10) with silk fibroin scaffolds and Group C (n?=?10) with tissue-engineered meshes. Group D (n?=?5) acted as the tissue control. The tissue-engineered mesh was produced as follows. AD-MSCs were obtained from adipose tissue of rats designated to Group C. The cells were seeded onto a silk fibroin scaffold, cultured and then observed by scanning electron microscopy (SEM). Histological studies of these meshes were performed at 4 and 12 weeks after implantation and mechanical testing was carried out on all groups before implantation and at 12 weeks after implantation. AD-MSCs displayed fibroblast-like shapes and were able to differentiate into adipocytes or fibroblasts. SEM observation showed that AD-MSCs proliferated and secreted a matrix onto the silk fibroin scaffolds. After implantation of the scaffolds into rats, histological analysis revealed better organized newly formed tissue in Group C than in controls. Group C also had a similar failure force (2.67?±?0.15 vs 2.33?±?0.38 N) and a higher Young’s modulus (2.99?±?0.19 vs 1.68?±?0.20 MPa) than a normal vaginal wall, indicating the potential of this tissue-engineered approach. AD-MSCs were validated as seed cells for tissue engineering. The silk fibroin scaffold thus shows promise for application with AD-MSCs in the fabrication of tissue-engineered mesh with good biocompatibility and appropriate mechanical properties for pelvic floor reconstruction.